高通量測序技術(shù)(High-throughput Sequencing)是一次并行對幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條DNA分子進(jìn)行序列測定,又稱(chēng)下一代測序技術(shù)(Next-Generation Sequencing)、二代測序技術(shù),其使得可對一個(gè)物種的基因組和轉錄組進(jìn)行深入、細致、全貌的分析,所以又被稱(chēng)為深度測序(Deep Sequencing)。
第二代測序技術(shù)的核心思想是邊合成邊測序(Sequencing By Synthesis),即通過(guò)捕捉新合成的末端的標記來(lái)確定DNA的序列。
文庫構建:文庫構建即為測序片段添加接頭。無(wú)論是PCR產(chǎn)生的片段還是基因組鳥(niǎo)/槍法打斷的片段都具有特異性(PCR中不同樣品反向引物插入了特異性的barcode,因此兩端也是特異的),兩端缺乏必要的引物因此混合DNA/片段不能直接擴增和測序。DNA/片段需要加接頭修飾才能進(jìn)行上機測序,這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為二代測序的文庫構建。
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