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    讓專業(yè)人士告訴你純化磁珠的試驗(yàn)操作步驟

    更新時(shí)間:2022-03-07      點(diǎn)擊次數(shù):5262
     
      純化磁珠適合于從各種PCR產(chǎn)物或酶促反應(yīng)液中高通量快速地回收100bp~50kb的DNA/RNA的片段,回收效率高達(dá)80%。能有效地去除PCR產(chǎn)物或酶促反應(yīng)液中的寡聚核甘酸、引物二聚體、鹽、蛋白質(zhì)等污染。
     
      純化磁珠的操作步驟:
     
      自備試劑:
     
      洗滌液:85%乙醇;
     
      洗脫液:BufferEB(10mMTris-HCl,pH8.0)或去離子水(pH在7.0~8.0之間)。
     
      磁力架:(建議使用深圳艾維迪泰生物科技有限公司針對(duì)200μLPCR管磁力架,貨號(hào):BMB32-0.2)
     
      實(shí)驗(yàn)步驟:
     
      1.充分混合震蕩磁珠,使管內(nèi)磁珠*均勻懸浮起來(lái)。
     
      2.向樣品管(可使用200μLPCR管或96孔板)中加入待純化的DNA樣品溶液。
     
      3.取1.8×樣品體積的磁珠溶液加入樣品管中,漩渦震蕩5秒后,室溫靜止結(jié)合5min。
     
      注:放置期間如出現(xiàn)磁珠沉降現(xiàn)象應(yīng)及時(shí)顛倒或者旋窩混勻,以保證磁珠處于懸浮狀態(tài)。
     
      4.將樣品管置于磁力架上2min左右或待磁珠被磁力架裝置*吸附,保持樣品管在磁力架上靜止,用移液槍吸取上清并棄掉,操作過(guò)程中避免觸碰到磁珠團(tuán)。
     
      5.保持樣品管在磁力架上,向管內(nèi)慢慢加入300μL85%乙醇,保持樣品管不離開(kāi)磁力架以及磁珠團(tuán)始終被吸附在管壁上,禁止分散開(kāi)。
     
      6.將樣品管置于磁力架上2min左右或待磁珠被磁力架*吸附,保持樣品管在磁力架上靜止,用移液槍吸取上清并棄掉,操作過(guò)程中避免觸碰到磁珠團(tuán)。
     
      7.重復(fù)步驟5~6,將管內(nèi)的液體全部吸除干凈。
     
      8.將樣品管從磁力架上取出,于室溫放置3~5min,使殘留乙醇充分揮發(fā)。
     
      注:避免真空干燥,磁珠過(guò)于干燥將會(huì)降低DNA/RNA洗脫效率。
     
      9.向管內(nèi)加入20~100μL洗脫液,并用移液槍輕輕吹打5-10次,使磁珠重懸混勻,操作過(guò)程中應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
     
      10.室溫放置5min以充分洗脫。
     
      注:為了提高洗脫效率,放置期間如出現(xiàn)磁珠沉降現(xiàn)象應(yīng)及時(shí)顛倒或者旋窩混勻,以保證
     
      磁珠處于懸浮狀態(tài)。
     
      11.將洗脫樣品管放回磁力架上2min或待所有磁珠都被磁力架裝置*吸附。
     
      12.小心地將洗脫上清轉(zhuǎn)移到新的滅過(guò)菌的管子中,在轉(zhuǎn)移過(guò)程不要碰到磁珠,如出現(xiàn)磁珠懸起現(xiàn)象請(qǐng)重復(fù)步驟11~12。
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